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2.2 柱层析
将 20×10cm 的层析柱石油醚和中性氧化铝填装，将菠菜叶的浓缩液滴加到顶部，然后打开下部活塞，使液面下降至柱面以下 1mm 左右，再关闭活塞，加入石油醚冲洗内壁，再打开活塞是使液面下降，反复几次使色素全部进入主体带色素全部进入柱体后，在顶部小心加约 1.5～2cm 高度的洗脱剂在下面用锥形瓶收集。洗脱剂成分为 9：1 的石油醚丙酮溶液和 1：7 的石油醚丙酮混合液，分别进行实验并对比结果。将收集到的色素进行紫外光谱测定。
三、结果与讨论
1.测量数据
1.1 各色素 Rf 值
叶绿素 b 的 Rf 值 =0.38
叶绿素 a 的 Rf 值 =0.53
胡萝卜素 Rf 值 =1
叶黄素的 Rf 值 =0.78。
1.2 各色素的紫外光谱
叶绿素 b 在 645nm 和 663nm 处都有吸收，但在 645nm 处吸光系数较大，为 45.60，在 663nm 处较小，为 9.27。
叶绿素 a 在 645nm 和 663nm 处皆有吸收，但在 645nm 处吸光系数较小，为 16.75，在 663nm 处较大为 82.04。
胡萝卜素在 400nm 到 500nm 之间均有吸收，在 500nm 处吸光系数较大为 56.78，在 400nm 处吸光系数较小，为 25.65。
叶黄素在 444nm 处有最大吸收峰。
1.3 数据分析
综上所得，胡萝卜素的 Rf 值最大，叶黄素次之，叶绿素 a 和叶绿素 b 的 Rf 值相近。四种色素的紫外光谱有所差异，其中叶绿素 a 和叶绿素 b 的最为相似。所测得的实验数据与刘志伟[1]所测的数据较为相似，他测得的数据是在石油醚乙酸乙酯 6：4 情况下，胡萝卜素 Rf 值为 0.98，叶黄素为 0.82 叶绿素为 0.61。在他进行的实验中，并没有区分此叶绿素为叶绿素 a 还是叶绿素 b，根据我们实验所测的数据此结果与测得的叶绿素 a 的值更为相似，所以可以判断他所测得的是叶绿素 a。
2.实验条件的选择和优化
本次实验并未对菠菜色素提取方法进行细致研究，直接采取了最为传统且广泛的抽滤法进行提取。但从实际而言，抽滤法缺点明显，抽滤不好控制，容易使非极性溶剂抽走并且操作复杂，提取纯度较低。与本次实验而言，提取结果对分离结果会产生一定影响。若要提高其纯度，可采取浸泡法、亚临界萃取、超声波提取和微波提取等方法。郭松斌对通过以上方法提取出的色素进行了精密度、稳定性和重复性实验，指出超声波提取和微波提取虽可以提高提取效率，但由于超声波的空化效应，微波的